標題《組織基質金屬蛋白酶抑制劑-2的表達純化及活性鑒定》
摘要：組織基質金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)抑制腫瘤遷移及侵襲。文中以人TIMP-2為研究對象,探索人TIMP-2蛋白的原核表達特征,并進行純化及活性鑒定。以人肺癌A549細胞的總RNA反轉錄得到的cDNA為模板,克隆人TIMP-2基因,構建pET28a重組表達載體;經(jīng)酶切檢測和測序分析的重組表達載體pET28a-TIMP-2轉入大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)中,利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,并對表達條件進行優(yōu)化。經(jīng)鎳親和柱純化后,用Westernblotting法鑒定融合蛋白His-TIMP-2,并用明膠酶譜法檢測融合蛋白的活性。研究發(fā)現(xiàn)融合蛋白His-TIMP-2在E.coliBL21(DE3)中以包涵體的形式存在;在一定范圍內,IPTG濃度對His-TIMP-2的表達量沒有顯著影響;而在該表達系統(tǒng)中,誘導溫度和時間是關鍵參數(shù),His-TIMP-2的表達量隨誘導溫度升高而增加;純化并復性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549細胞表達的基質金屬蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的獲得為后續(xù)深入研究人TIMP-2的功能及機制奠定基礎,并對腫瘤治療具有重要意義。
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